蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF
品 名 | 蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF |
英文名 | Protein AG NUPharose Fast Flow, Protein AG NUPharose FF |
目录号 | NRPB13S(预装柱) |
规 格 | 1 ml预装柱,5 ml预装柱,10 ml预装柱 |
运 输 | 2 ~25℃,常压、避光 |
贮 存 | 20%乙醇,2 ~8℃ |
保质期 | 3年 |
相关介绍:
蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF是将重组蛋白A蛋白G融合蛋白(r-PAG,NRPA14S)键合在琼脂糖凝胶微球上形成的亲和分离介质。与单独的蛋白A或蛋白G分离介质相比,具有更宽广的结合范围,可以与人的所有IgG亚型、IgA、IgE、IgM结合,但不能与小鼠的IgA、IgM和血清白蛋白结合,适合用于鼠IgG单抗的提取和检测。同时融合后的r-PAG降低对pH的依赖,允许在pH5 ~8进行结合。
技术指标:
基质 | 4%交联琼脂糖凝胶微球 |
配基 | 蛋白A蛋白G融合蛋白 |
配基密度 | ≥6 mg/ml |
填料粒径 | 60 ~180 μm |
**流速 | 800 cm/h |
推荐流速 | 20 ~100 cm/h |
pH稳定性 | pH 3 ~9,pH2 ~10(清洗) |
耐反压 | 0.3 MPa |
载量 | ≥ 20 mg/ml IgG |
保存条件 | 2 ~8℃保存于20%乙醇溶液中 |
应用举例:
结合缓冲液:20 mM磷酸缓冲液,150 mM NaCl,pH 7.4
洗脱缓冲液:0.1 M Glycine-HCl缓冲液,pH 2.5
中和缓冲液:1 M Tris-HCl,pH 9.0
1) 1ml蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF预填柱用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液;
2) 用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积;
3) 将3 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到15 ml,0.45μm滤膜过滤上样;
4) 用结合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床体积;
5) 用洗脱缓冲液洗脱抗体,收集洗脱峰,并用中和缓冲液调节其pH至中性;
6) 目的抗体洗脱后用结合缓冲液清洗5 ~ 10个柱体积平衡柱子;
7) 分析洗脱下来的兔多抗。
注意事项:
1) 预填柱使用简易方便,在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务;
2) 样品洗脱后一般pH很低,应立刻用碱性中和缓冲液(如1 M Tris-HCl,pH9.0)将收集到的抗体溶液中和到中性,或在收集容器中事先装5% ~ 10%、pH 7.5的缓冲液(如1 M Tris-HCl或1 M磷酸缓冲液),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活;
3) 使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,如果已经产生气泡,可以自行重装柱子;
4) 多次使用后会有沉淀蛋白,强疏水性蛋白,脂蛋白,脂质体等非特异吸附凝胶上,可以用0.1 %去垢剂短时间清洗,如0.1% TritonX-100清洗2个柱体积,立即用结合缓冲液洗5 ~ 10个柱体积。也可以用70%乙醇清洗作同样清洗。
推荐流速 | |||
预装柱体积 | 1 ml | 5 ml | 10 ml |
流速(ml /min) | 0.2 | 1 | 2 |
5)
种类 Species | 亚型 Antibody Class | 蛋白A Protein A | 蛋白G Protein G | 蛋白A蛋白G融合蛋白 Protein AG |
人 Human | IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab | +++ +++ + +++ + - + + | +++ +++ +++ +++ - - - + | +++ +++ +++ +++ + - + + |
小鼠 Mouse | IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM | + +++ +++ +++ - | ++ +++ +++ +++ - | ++ +++ +++ +++ - |
大鼠 Rat | IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c | + - - +++ | ++ +++ + +++ | ++ +++ + +++ |
牛 Cow | IgG1 IgG2 | + +++ | +++ +++ | +++ +++ |
山羊 Goat | IgG1 IgG2 | + +++ | +++ +++ | +++ +++ |
马 Horse | IgG(ab) IgG(c) IgG(T) | + + - | - - +++ | + + +++ |
兔Rabbit | IgG | +++ | +++ | +++ |
猪Pig | IgG | +++ | + | +++ |
狗Dog | IgG | +++ | + | +++ |
鸡Chicken | IgY | - | - | - |
-表示不结合;+表示微弱结合;++表示中等结合;+++表示很强结合。
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