辉骏生物 SILAC应用之蛋白质互作实验 SILAC应用之蛋白质互作实验服务

一、SILAC研究蛋白质相互作用概述
        SILAC (Stable isotope labeling with amino acids in cell culture, SILAC) 结合免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)，来寻找互作蛋白，是SILAC在定量蛋白质组学研究基础上的进一步应用。基本思路是通过质谱鉴定及分析蛋白的相对表达量来判断某一蛋白是否与诱饵蛋白特异结合，当实验组与对照组中某个蛋白质含量达到统计学差异时，即可判定该蛋白质与诱饵蛋白质存在互作。

 

二、与传统的免疫共沉淀(CoIP)或Pulldown相比，SILAC-IP有以下优势
  1、特异性强,假阳性极低；      
  2、高通量，液相与质谱连用，能**限度的寻找到相互作用的蛋白质；    
  3、灵敏度高;
  4、能直接检测出与bait蛋白互作的其它蛋白的相对含量。
 

三、SILAC研究蛋白质相互作用技术流程

实验流程：

图1 正常细胞株的SILAC-IP实验设计
 

图2 过表达细胞株的SILAC-IP实验设计
 

图3 RNAi细胞株的SILAC-IP实验设计

                  图4：SILAC分析蛋白质相互作用的质谱峰图及被鉴定蛋白的生物信息分析

五、SILAC研究蛋白质相互作用技术服务内容
1、细胞同位素标记；(本公司出售L、M、H型Lys和Arg)
2、样本制备与定量；
3、SDS-PAGE分离、酶切、LC-MS/MS分析；
4、蛋白定性及定量分析；
5、互作蛋白的生物信息学分析
6、实验报告整理。

 

六、SILAC适用
    SILAC能标记活的可传代细胞、细菌等材料，不能标记组织、体液等样本，详情请咨询我司。

 

七、实验服务报告内容
  1、蛋白质鉴定；
  2、SILAC鉴定相互作用蛋白质的分析结果；  
  3、顾客指定蛋白质对应的质谱峰图；  
  4、完整的技术服务报告，包括实验步骤、使用试剂、仪器、软件检索参数等。

 

八、实验服务周期及收费标准：咨询本公司

 

九、质量承诺
 1、根据您的实验目的为您设计科学合理的SILAC实验方案；
 2、提供客观、真实的实验结果。