Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF
品 名 | Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF |
英文名 | Strep-Tactin NUPharose Fast Flow, Strep-Tactin NUPharose FF |
目录号 | NRPB42S(预装柱) |
规 格 | 1 ml预装柱,5ml预装柱,10 ml预装柱,特殊规格订制 |
运 输 | 2 ~25℃,常压、避光 |
贮 存 | 20%乙醇,2 ~8℃ |
保质期 | 3年 |
相关介绍:
Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF是一种将Strep-Tactin键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质,主要用于纯化Strep II标签蛋白。StrepII标签为8个氨基酸的小标签(WSHPQFEK),由于标签小,仅为1 kDa左右,一般不影响融合后蛋白质的结构和功能,常用于融合表达蛋白质的检测和纯化。
本产品的配基Strep-Tactin是链霉亲和素(Streptavidin)的突变体,与链霉亲和素相比,Strep-Tactin对StrepII标签的亲和能力至少强10倍以上,能够在温和的条件下与Strep II融合蛋白结合和解离。由于Strep-Tacin对Strep II标签具有高度特异性,一般一步纯化就能获得高纯度的蛋白质样品。
Strep II标签蛋白与凝胶结合后可使用脱硫生物素竞争方式进行洗脱,该洗脱方式比较温和,一般不会影响蛋白质的性质。如StrepII标签蛋白质能耐受碱性条件,也可用碱液洗脱,比如10 mM NaOH等。
Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF能耐受较高的碱性条件,可以用0.5 M NaOH进行再生清洗和去除热源等。
另外,2-(4-羟基苯唑)苯甲酸(H***)也可用于凝胶再生,过量的H***能以竞争的方式替换脱硫生物素,但在无H***的缓冲液中,Strep-Tactin与H***会发生解离,从而使H***脱落,实现再生。
技术指标:
基质 | 4%琼脂糖凝胶微球 |
配基 | Strep-Tactin |
配基密度 | ≥5 mg/ml |
填料粒径 | 60 ~180 μm |
**流速 | 800 cm/h |
推荐流速 | 20 ~100 cm/h |
pH稳定性 | 短时间pH 2 ~13;长时间pH 4 ~11 |
耐反压 | 0.3 MPa |
载量 | ≥6 mg/mlStrepII标签蛋白 |
使用方法:
1 推荐缓冲液
纯化Strep II标签蛋白
结合缓冲液:100 mM Tris-HCl,150 mM NaCl,1 mMEDTA,pH 8.0;
或20 mM NaH2PO4,280 mM NaCl,6 mMKCl,pH 7.4
洗脱缓冲液:结合缓冲液 + 2.5 mM 脱硫生物素;
或10 mM NaOH
再生缓冲液:0.5 M NaOH;
或结合缓冲液+1 mM H***
2 样品准备
上柱的样品应尽量保持与结合缓冲液一致。通常可用透析、超滤、稀释等方法处理样品。并且上柱前应过0.45 μm滤膜或高速离心去除不溶物。
3 样品纯化
3.1平衡:取适量的Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF装入合适的层析柱中,用蒸馏水清洗5个柱体积去除保存液,再用结合缓冲液平衡5个柱体积,建议流速为100 cm/h。
3.2 上样:将准备好的样品上柱,建议流速为20 ~ 100 cm/h,可根据实际结合情况选择流速,能获得较好的效果。
3.3 再平衡:上样后用结合缓冲液平衡10个柱体积以上,或平衡至基线,洗去杂质,推荐流速为100 cm/h。
3.4 洗脱:用洗脱缓冲液洗10 ~20个柱体积,建议流速为100 cm/h,收集的洗脱液应立即调节pH至稳定范围,并根据需要置换缓冲液。
3.5 NaOH再生:洗脱目的蛋白后的柱子用蒸馏水清洗3 ~ 5个柱体积,并用0.5 MNaOH再生3 ~ 5个柱体积,再用蒸馏水清洗至中性,用20%乙醇保存柱子,或进行下一次纯化。
3.6H***再生:用脱硫生物素洗脱目的蛋白的,还可以用H***缓冲液再生,一般用H***的结合缓冲液洗15个柱体积,再用结合缓冲液洗30个柱体积,然后可以用20%乙醇保存柱子,或进行下一步纯化。H***上柱后凝胶颜色会变为红橙色,在结合缓冲液平衡后会恢复正常的白色,这种再生方式一般使用体积会大些。
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